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大龍 PCR 儀（基因擴(kuò)增儀，代表型號(hào) TC1000?G、TC2000?G 梯度 PCR 儀；Accurate 系列熒光定量 PCR 儀），本質(zhì)是熱循環(huán)儀，硬件依靠帕爾貼 Peltier 半導(dǎo)體溫控模塊，軟件執(zhí)行 PCR 生化反應(yīng)程序，實(shí)現(xiàn) DNA 體外指數(shù)擴(kuò)增。

一、生化反應(yīng)原理（PCR 擴(kuò)增原理）

通過(guò)重復(fù)變性?退火?延伸三步溫度循環(huán)，完成核酸擴(kuò)增。

1. 變性（94?98℃）：高溫打斷 DNA 雙鏈氫鍵，雙鏈解旋，變成兩條單鏈模板。
2. 退火（50?65℃）：快速降溫，引物與單鏈模板特異性堿基互補(bǔ)結(jié)合。梯度機(jī)型可模塊不同位置設(shè)置不同退火溫度，一次實(shí)驗(yàn)篩選最優(yōu)退火條件。
3. 延伸（72℃）：耐熱 Taq DNA 聚合酶以 dNTP 為原料，從引物 3’端合成新 DNA 鏈。

每完成 1 個(gè)循環(huán)，目標(biāo) DNA 拷貝數(shù)理論翻倍；25?40 輪循環(huán)后微量模板得到百萬(wàn)級(jí)擴(kuò)增。

普通 PCR 儀只做擴(kuò)增；熒光定量 qPCR（Accurate 系列）增加光學(xué)檢測(cè)單元，每循環(huán)采集熒光信號(hào)，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)產(chǎn)物增量，實(shí)現(xiàn)定量分析大龍興創(chuàng)實(shí)...。

二、儀器硬件工作原理（大龍核心技術(shù)）

1. 帕爾貼半導(dǎo)體溫控（Peltier） 通電改變電流方向，實(shí)現(xiàn)模塊快速加熱 / 制冷；配合 PID 閉環(huán)溫控，實(shí)現(xiàn)快速升降溫；大龍機(jī)型帶邊緣溫度補(bǔ)償技術(shù)，消除孔位邊緣效應(yīng)，保證整板溫度均一性＜0.3℃。
2. 熱蓋加熱 熱蓋溫度高于反應(yīng)液溫度，防止 PCR 管內(nèi)水汽冷凝到管蓋，避免反應(yīng)體系體積濃縮、干管。
3. 梯度功能（梯度 PCR 型號(hào)） 金屬模塊橫向分區(qū)控溫，同一板上同時(shí)產(chǎn)生 1?42℃跨度的梯度溫度，用于退火溫度條件摸索。
4. 熒光定量機(jī)型額外光學(xué)系統(tǒng)（Accurate 系列） 免維護(hù) LED 光源激發(fā)，MPPC 光電檢測(cè)器采集熒光，多通道檢測(cè)，讀取每孔熒光強(qiáng)度，輸出 Ct 值、擴(kuò)增曲線，完成定量、熔解曲線分析大龍興創(chuàng)實(shí)...。

三、整機(jī)工作流程

1. 將 PCR 反應(yīng)體系加入 PCR 管 / 八聯(lián)管 / 96 孔板，放置金屬模塊；
2. 設(shè)置程序：預(yù)變性→（變性?退火?延伸）循環(huán)→終延伸→4℃保溫保存；
3. 儀器帕爾貼模塊按照程序自動(dòng)切換溫度，熱蓋同步開(kāi)啟；
4. 普通 PCR：運(yùn)行結(jié)束后取出產(chǎn)物，電泳檢測(cè)；
5. qPCR 熒光定量：擴(kuò)增過(guò)程同步采集熒光，軟件直接輸出結(jié)果。

四、關(guān)鍵原理衍生的使用要點(diǎn)

1. 溫度均一性直接決定孔間擴(kuò)增重復(fù)性；模塊不能磕碰，保證管子和模塊良好貼合。
2. 熱蓋壓力要合適，壓力過(guò)低會(huì)冷凝蒸發(fā)；壓力過(guò)大容易壓壞 PCR 管。
3. 帕爾貼模塊禁止驟冷驟熱暴力操作，定期模塊清潔，無(wú)腐蝕性試劑殘留。
4. 梯度 PCR：梯度設(shè)置只改變退火步驟，其他步驟溫度全模塊統(tǒng)一。

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